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        羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書

        產(chǎn)品簡介

        羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
        sTREM-1檢測試劑盒經(jīng)孵育后,未結(jié)合的生物素化酪胺通過洗滌去除

        更新時間:2021-03-14
        訪問次數(shù):357
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        組成及試劑配制:
        1、酶標板:一塊(96孔)
        2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
        注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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         產(chǎn)品名稱

         羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書

         英文名稱

         Jaagsiekte Sheep Retrovirus(JSRV)RTPCR

         貨號

         LZP6895

        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
        一、 試劑的準備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
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        蛋白胨Anti-RAR-α   沒食子兒茶素

        Kovacs 氏靛基質(zhì)試劑Anti-RAR-β  麥芽糖

        鳥氨酸脫羧酶試驗Anti-RASSF1A  毛地黃素

        氨基酸脫羧酶試驗對照Anti-Rat IgA  牡荊內(nèi)酯

        無菌液體石蠟Anti-Resistin  尼泊金甲

        麥芽糖發(fā)酵管Anti-RhoA   尼泊金乙

        培養(yǎng)基Anti-ROCK1   標準品

        木糖發(fā)酵管Anti-ROCK2   尼泊金

        鼠李糖發(fā)酵管Anti-RRAD   牛蒡子苷

        Fraser 肉湯增菌液基礎(chǔ)anti-RSV  尼泊金丁
        羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書2-Deoxy-D-glucose,≥99%通用試劑 1G

        Aspartame,≥98%通用試劑 1G

        L-(-)-Fucose,≥99%通用試劑 1G

        Adonitol,≥99%通用試劑 1G

        D(-)-lyxose,99%通用試劑 1G

        β-Chloralose,98%通用試劑 5G

        Maltotriose hydrate,95%通用試劑 1G

        Xylitol,≥99%通用試劑 25G

        Dulcitol,≥99%通用試劑 25G

        4-Hydroxy-7-methoxyquiline,97%通用試劑 1G

        6-Nitroindoline,97%通用試劑 1G

        Azodicarboxylic dimorpholide,≥98.0%通用試劑 5G

        5-Hydroxyquiline,99%通用試劑 250MG

        5-Bromoquiline,97%通用試劑 1G

        2-Phenylquiline,99%通用試劑 1G

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