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        當(dāng)前位置:首頁  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測試劑盒  -  50T桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書

        桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書

        產(chǎn)品簡介

        桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
        Cryα檢測試劑盒性狀:盒狀液體。
        實驗方法:競爭法、一步法、夾心法、高敏法等。
        作用范圍:科學(xué)研究。
        樣品形式:血清血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清其它生物液體

        更新時間:2021-03-13
        訪問次數(shù):461
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        注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書

         英文名稱

         Taura Syndrome Virus(TSV)PCR

         貨號

         LZP7371

        實驗過程:
        一、試劑準(zhǔn)備
        1. DNA模板
        2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
        一、 試劑的準(zhǔn)備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
        組成及試劑配制:
        1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
        2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
        3,4-DimethoxyphelN,N-二甲基對苯二胺 99%,用于過氧化物酶試驗硝酸 電子級

        3,4-Dimethoxyphenyl beta-D-glucosideN,N-二甲基對苯二胺 AR,環(huán)保試劑,96%硫酸 AR,95-98%()

        3,4’-Di-O-methylellagic acid三十二烷 98%硫酸 99.999% metals basis

        L-Alanine二苯氨基脲 AR四丁基磷酸二氫銨 98%

        D-Alanine乙 for HPLC, >99.0%(GC),含2%乙作穩(wěn)定劑間氨基苯甲酸 99%

        DL-Alanine二甲基黃 indicator對氨基苯甲酰胺 98%

        β-Alanine砷試劑 AR,99.0%2,2-雙[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷 98%

        BOC-L-Alanine1,2-二氯乙烷 standard for GC,>99.9%(GC)對氨基苯甲酸丁酯 98%

        BOC-D-Alanine1,3-二氨基-4-(5-溴-2-吡啶偶氮)苯 AR雙(2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基)癸二酸酯 98%

        L-Alanine ethlester hydrochloride2-(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚 AR4,4'-雙(4-氨苯氧基)聯(lián)苯 97%

        D-Alanil二乙氨基乙基纖維素-1 TLC2,2-二(3-氨基-4-羥苯基)六氟烷 98%

        L-Arginine二甲基黃 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0% (HPLC)3,3',4,4'-聯(lián)苯四甲酸二酐 97%

        D-Arginine二十烷 standard for GC,>99%(GC)1,4-環(huán)己烷二羧酸(cis + trans) 99%

        DL-Arginine二十烷 AR2,2'-二羥基-4-甲氧基二苯甲酮 98%

        L-Arginine HCL二十烷  99%4、4'-二氨基苯酰替苯胺 98%

        L-精氨酸琥珀酸鋇鹽二十烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)2,4-二羥基苯甲 98%

        標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:)p35/25 (C64B10) Rabbit mAbPDXK  吡哆激酶抗體

        標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:)Acetyl-Histone H3 (Lys14) (D4B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)PDX1  胰島素促進因子抗體(胰十二指腸同源異型盒蛋白)

        鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L H3)IKKα AntibodyPDSS2  抑癌蛋白DLP1抗體

        鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.0 mol/L H3)Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAbPDPK1  3磷酸肌依賴性蛋白激酶1抗體

        鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.5 mol/L H3)PKCε (22B10) Rabbit mAbPDLIM3/ALP  輔肌動蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體

        銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/l,溶劑:1%硫酸)IKKβ AntibodyPDLIM1  細(xì)胞骨架蛋白C端PDLIM1抗體

        銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/l,溶劑:1%硫酸)IKKγ AntibodyPdk4  酮酸脫氫酶激酶4抗體

        鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(三價鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml)OGDH (E1W8H) Rabbit mAbPDK2  酮酸脫氫酶激酶亞型2抗體

        鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:)Phospho-IKKγ (Ser376) AntibodyPDIA2/PDI  蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體

        鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:)IKKε AntibodyPDI/P4HB/ERBA2L/PDIA3  蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體
        桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書Sodium D-pantothenate,99%通用試劑 5G

        2,3,5-Triiodobenzoic acid,98%通用試劑 5G

        γ-Lilenic acid,≥99%通用試劑 10MG

        Humic acid通用試劑 10G

        Amiphylline hydrate,98%通用試劑 25G

        (2′Z)-Indirubin (HPLC,≥98%)通用試劑 5MG

        α-Hydroxyisobutyric acid,99%通用試劑 5G

        9,10-Phenanthrenequine,95%通用試劑 5G

        12-Amilauric acid,95%通用試劑 5G

        Kainic acid mohydrate,≥99%通用試劑 5MG

        Cyclopentadienyl iron(II) dicarbonyl d...通用試劑 1G

        N-Acetylsulfanilyl chloride,98%通用試劑 25G

        3,4-Dimethoxybenzyl alcohol,96%通用試劑 5G

        Benzamidine hydrochloride hydrate,≥99%通用試劑 5G

        3-Hydroxyphenylacetic acid,≥99%通用試劑 1G

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