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        當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T真鯛虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

        真鯛虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

        產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        真鯛虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品
        SEP1檢測(cè)試劑盒在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí),以價(jià)格優(yōu)、到貨快、服務(wù)周到等優(yōu)點(diǎn)獲得了科研人士的*-MDH地美環(huán)素鹽酸鹽 ≥90% (HPLC)乙酸甲脒 99%

        Lactoperoxidase from bovine milk順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸乙酯 90%四甲基氟代脲六氟磷酸酯 98%

        Pull

        更新時(shí)間:2021-03-13
        訪問(wèn)次數(shù):462
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        注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         真鯛虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

         英文名稱

         Red Sea Bream Iridovirus(RSIV)(PCR

         貨號(hào)

         LZP7219

        組成及試劑配制:
        1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
        2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
        ?
        實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
        一、試劑準(zhǔn)備
        1. DNA模板
        2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
        4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
        三、注意事項(xiàng)
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
        2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
        PhenazineN-2-羥乙基哌-N'-2-乙磺酸  99%4-三氟甲氧基苯胺 99%

        PZ魯米諾 98%芐基酮 98%

        Squalene3-(N-啉)磺酸鈉 99.5%(T)氧化鉿(IV)  99.99% metals basis

        1-OctadeceneN,N′-亞甲基雙烯酰胺 CP,97% Standard for GC

        1-TetradeceneN,N′-亞甲基雙烯酰胺 for electrophoresis, ≥99.0% (T)溶液 AR,30-33 wt. % in absolute ethal

        1-UndeceneN,N′-亞甲基雙烯酰胺 for molecular biology, ≥99.0% (T)溶液 CP,30-33 wt. % in absolute ethal

        NSA 嗎啉乙磺酸,一 分子生物學(xué)級(jí), ≥99% (T)2-氨基-2-甲基-1- 97%

        MA3-(N-啉)磺酸 99%碳酸氫 AR,99.5%

        Phthlandione嗎啉乙磺酸鈉鹽 99%無(wú)碳酸 AR,99%

        Dodecenylsuccinic anhydride6-甲氧基喹啉 96%無(wú)碳酸 GR,99.5%

        HHPA3-甲基-2-苯并噻唑酮腙鹽酸鹽,合 98%無(wú)碳酸 PT

        Nadic anhydride酚試劑 AR,98.0%無(wú)碳酸 SP

        SAA3-嗎啉-2-羥基磺酸 99%無(wú)碳酸 99.99% metals basis

        TCPA3-嗎啉-2-羥基磺酸鈉 99%無(wú)碳酸 99.995% metals basis

        2-Methylbenzothiazole氯化硝基四氮唑藍(lán) 98%無(wú)碳酸 ACS, ≥99.0%

        5-Nitrobenzimidazole氯化硝基四氮唑藍(lán) 分子生物學(xué)級(jí)硝酸 AR,99.0%

        化木蘭花堿Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb (HRP Conjugate)PPT1  棕櫚酰蛋白硫酯酶1抗體

        去甲烏藥堿鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPP4C  絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶4C抗體

        去甲烏藥堿鹽酸鹽Phospho-Doublecortin (Ser334) (D11B10) Rabbit mAbPPP2R3A  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基3A抗體

        二氫歐山芹素 (標(biāo)準(zhǔn)品)Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPP2R3  蛋白質(zhì)磷酸酶2A亞基3抗體

        異澤蘭黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAbPPP2R1B  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B抗體

        利莫那班羧酸B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAbPPP2R1A  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1A抗體

        玉米黃質(zhì)Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PPO  腺樣癌特異性相關(guān)抗原PPO抗體

        三亞乙基硫代磷酰胺Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAbPPM2C  蛋白磷酸酶2C抗體

        普拉克索堿Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAbPPM1G  蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體(PP2Cγ)

        普拉克索堿(標(biāo)準(zhǔn)品)SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPM1F  鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶磷酸酶抗體
        真鯛虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT100克

        人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

        人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

        人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

        人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

        人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

        人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

        人腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克
        檢測(cè)步驟:
        一、 試劑的準(zhǔn)備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

         

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