?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
Arsenazo I二氯化鉑 Pt basis ≥73%反,反-2,4-庚二烯 90%

Arsenazo III鈀碳酸鈣 鈀含量, 5.0%三硫酮 ≥99%, FG

Barium carbonate醋酸鈀 99.9% metals basis4-羥基-3-甲氧基苯甲 98%

Barium chromate醋酸鈀 99.98% metals basis六氯酮 99%

Barium stearate三氯化銠，合 Rh 38.5-42.5% 2-異基-4-甲基噻唑 98%

Barium hydroxide octahydrate三氯化釕 合物 38.0-42.0% Ru basis3-甲基-1-丁硫 97%

Silicon powder銠粉 99.95% metals basis甜瓜 80%

Silicon銠碳催化劑 銠含量 (wt%) ，5%2-甲基庚酸  98%

Silicon moxide釕碳 Ru 5%香草酸甲酯 99%

Silicon carbide氧化釕 99.9% metals basis4-甲硫基-4-甲基-2-戊酮 99%

Silicon dioxide氧化釕(IV) 合物  釕含量75%4-甲基-4-巰基-2-戊酮 98%

Silicone氯亞鉑酸鈉 Pt 44.5%3-甲硫基-1-己 99%

Silicone碳酸銀 AR,99.0%3-巰基-1-己 98%

Silicone氯金酸鈉 金含量,48% 3-甲基-2--1-硫 98%

Silicone磷酸銀 銀含量, 77.0 % 2-甲基-3-呋喃硫 95%

Silicone二氯四氨鈀 Pd ≥43.0%2-甲基四-3-硫 97%

柚皮苷二氫查爾酮CAMLG (D5L9J) Rabbit mAbProtamine 2  魚精蛋白2抗體

潮霉素B(羅氏原裝)eRF1 AntibodyProstatic Acid Phosphatase  前列腺酸性磷酸酶抗體

芹菜苷; 芹黃苷CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAbProstaglandin E Receptor EP2  前列腺素E2受體2抗體

酚-7-O-葡萄糖苷CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAbProSAPiP1   含脯氨酸突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體

酚-4’-O-葡萄糖苷；酚-4’-O-β-D-葡萄糖苷Histone H4 (D2X4V) Rabbit mAbProperdin  P因子/備解素抗體

柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野決明苷PSMC3/TBP1 AntibodyProminin 2  造血干細(xì)胞抗原CD133相關(guān)蛋白抗體

山柰酚-3-O-蕓香糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)ATR (E1S3S) Rabbit mAbPROK2/Prokineticin 2  前動力蛋白2抗體

泮托拉唑鈉一物Phospho-BMAL1 (Ser42) AntibodyPROK1/PRK1/EG-VEGF  內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長因子抗體

泮托拉唑鈉(標(biāo)準(zhǔn)品）Symmetric Di-Methyl Histone H3 (Arg8) (E1W5H) Rabbit mAbProhibitin  抑制素/腫瘤抑制因子抗體

靛玉紅Acetyl-Histone H4 (Lys12) (D2W6O) Rabbit mAbProfilin 2  前纖維蛋白2抗體
棘盤瑞氏絳蟲PCR檢測試劑盒廠家人載脂蛋白A5(apo-A5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

人載脂蛋白C3(ApoC3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT50克

人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT15×20cm/張

人早老素2(PS-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：13.5×15cm/張

人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：30×3cm/卷