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        青霉通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家

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        青霉通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家
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        更新時(shí)間:2021-03-13
        訪問次數(shù):488
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        注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         青霉通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家

         英文名稱

         Penicillium spp.PCR

         貨號(hào)

         LZP7130

        實(shí)驗(yàn)過程:
        一、試劑準(zhǔn)備
        1. DNA模板
        2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
        4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
        三、注意事項(xiàng)
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
        2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
        一、 試劑的準(zhǔn)備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
        組成及試劑配制:
        1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
        2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
        Chlorosulphonphel S乙酸異戊酯 AR,99%4-(1-羥乙基)吡啶 98%

        AgDDTC乙酸異戊酯 CP,98%4(5)-羥甲基咪唑鹽酸鹽 98%

        Alizarin乙酸異戊酯 ≥99%, FCC, FG(R)-3-羥基吡咯烷鹽酸鹽 98%

        Alizarin red甲酸異戊酯  mixture of isomers, ≥97%, FG4-苯甲酸甲酯 98%

        Alizarin violet 3B異戊酯 97%2-苯甲酸甲酯 98%

        Alizarin yellow GG乙酸芳樟酯 96%3--4吡啶 95%

        Alizarin yellow R乙酰酸 AR,99.0%吲哚-2-羧酸 98%

        Alizarin yellow R sodium salt葉 98%吲哚-3-羧酸 98%

        Acid alizarin blue B芳樟 98%1-甲基環(huán)戊 99%

        Alkali blue 6BDL-乳酸 ACS, ≥85%1-甲基-3-吲哚酸 97%

        Alkali blue 6B sodium salt月桂酸 AR,98%5-甲基異噁唑-4-甲酸 98%

        CPA-I丁酸甲酯 Standard for GC,>99.5% (GC)3,3-二甲基烯酸甲酯 98%

        CPA-Ⅲ丁酸甲酯 99%3-甲基-4-甲酸 99%

        CPA-Ⅳ丁酸甲酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC),用于環(huán)境分析3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯甲酸 97%

        CPA-mA異丁 >99.0%(GC)4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯甲酸 97%

        CPA-mN異丁 CP,98%6-甲基吲哚 98%

        庚酸雌二(標(biāo)準(zhǔn)品)SignalSilence® UCHL1 siRNA IIRASAL1  RAS蛋白樣激活劑1抗體

        炔雌(標(biāo)準(zhǔn)品)CARD9 AntibodyRASA3  Ras-GTP酶激活蛋白3抗體

        炔雌CK1δ AntibodyRarres3/TIG3  視黃酸受體應(yīng)答蛋白3抗體

        乙硫異煙胺,硫異煙胺NLRC4 (D5Y8E) Rabbit mAbRARRES1/TIG1  視黃酸受體應(yīng)答蛋白1抗體

        乙硫異煙胺,硫異煙胺(標(biāo)準(zhǔn)品)IL-1β (D4T2D) Rabbit mAb (Mouse Specific)RAR α  維甲酸受體-α 抗體

        依曲韋林Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb (PE Conjugate)RAR gamma/Retiic Acid Receptor gamma  維甲酸受體γ抗體

        法莫替丁Smad1 (D59D7) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)RAR Beta  維甲酸受體β抗體

        法莫替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Src (Ser17) (D7F2Q) Rabbit mAbRaptor  mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體

        非布索坦Phospho-Bim (Ser77) (D4H12) Rabbit mAbRAP2B  原癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AP2B抗體

        非布索坦(標(biāo)準(zhǔn)品)Keratin 17/19 (D4G2) XP® Rabbit mAbRap2A  Rap2A抗體
        青霉通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家人磷酸甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:40片/箱

        人磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1公斤

        人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

        人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:5克

        人磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT,避光500毫克

        人磷酸葡萄糖變位酶(PGM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT500克

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