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        綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒規(guī)格

        產(chǎn)品簡介

        綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒規(guī)格
        上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
        Tgtp檢測試劑盒對于長期貯存的制備品,應充分考慮各方面的影響因素,規(guī)范操作;

        更新時間:2021-03-13
        訪問次數(shù):523
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        注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

         產(chǎn)品名稱

         綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒規(guī)格

         英文名稱

         Ovine Astrovirus (OAstV)RTPCR

         貨號

         LZP7096

        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
        4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
        一、 試劑的準備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
        試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
        熒光PCR反應液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應條件
        將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
        組成及試劑配制:
        1、酶標板:一塊(96孔)
        2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
        2-Amithiazol-4-acetic acid對羥基聯(lián)苯 分析標準品,用于環(huán)境分析肉桂酸乙酯 99%

        Citrinin棕櫚酸棕櫚酯 98%楊酸乙酯 99%

        Gemcitabine棕櫚酸棕櫚酯 95%楊酸乙酯 ≥99%, FCC

        dFdCyd藍五號鈉鹽 80%菠蘿酸乙酯 99%

        Balofloxacin聚(甲基乙烯基共聚馬來酸) Mw ~216,000 to ~80,000, powder菠蘿酸乙酯 ≥99%, FCC, Kosher

        LVFX四苯 99%乙基香蘭素 98%

        Clarithromycin軟脂酸 分析標準品,>99%(GC)母菊酯 98%

        Gibberellin A3苯基三氯化錫 分析標準品丁香酚 99%

        Gibberllin A4+7苯基三氯化錫 98%桉葉油 99%

        Zeatin二甲基二烯基氯化銨/烯酰胺共聚物 10 wt. % in H2O桉葉油 萜GC標準品 ,>99.5% (GC)

        Trans-Zeatin對位紅 分析標準品,用于食品分析桉葉油 ≥99%, FCC

        ABA巖芹酸 分析標準品,>99%(GC)4-乙基愈創(chuàng)木酚 99%

        Adenine原卟啉 95%4-乙基愈創(chuàng)木酚 ≥98%, FCC, FG

        Adenine hydrochloride聚烯酸 平均分子量M.W ~1,800 乙基麥芽酚 99%

        VB4聚烯酸 平均分子量M.W ~450,000乙基麥芽酚 99%, FCC, FG

        Chlormequat chloride液體石蠟 色譜固定液,80℃乙酰酸乙酯 99%

        環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺(標準品)Phospho-HER3/ErbB3 (Tyr1289) Blocking PeptideSDH/Sorbitol Dehydrogenase  山梨脫氫酶抗體

        頭孢西丁鈉ATF-4 (D4B8) Rabbit mAbSDH/S6PDH  6-磷酸山梨脫氫酶抗體

        頭孢西丁鈉(標準品)DEPTOR/DEPDC6 (D9F5) Rabbit mAbSDF4  基質(zhì)細胞衍生因子4抗體(鈣結合蛋白)

        頭孢西丁酸(頭孢西丁)Phospho-GRB10 (Ser476) (D4E6) Rabbit mAbSDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子-1抗體

        頭孢西丁酸(頭孢西丁)(標準品)Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAbSDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子1抗體

        纈沙坦Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAbSDCG1  血清學定義結腸癌抗原1抗體

        纈沙坦(標準品)TCF12/HEB (D2C10) Rabbit mAbSDCCAG8  結腸癌抗原8抗體

        格列吡 FKBP4 AntibodySDCCAG10  結腸癌抗原10抗體

        格列吡 (標準品)Arrestin 1/S-Arrestin AntibodySCYLV  甘蔗SCYLV抗體

        鹽酸多奈哌齊I型SSTR1 AntibodySCYL1BP1  SCYL結合蛋白1抗體
        綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒規(guī)格人角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

        人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克

        人窖蛋白(Cav-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100毫克

        人結腸癌抗原(CCA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

        人結蛋白(Des)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

        人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

        人結締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

        人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃250毫克

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