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        恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書

        產(chǎn)品簡介

        恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
        RNASE檢測試劑盒對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。保存環(huán)境:2-8℃低溫、避光、防潮

        更新時間:2021-03-13
        訪問次數(shù):644
        詳細介紹在線留言

        注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書

         英文名稱

         Ndumu VirusRTPCR

         貨號

         LZP7047

        組成及試劑配制:
        1、酶標板:一塊(96孔)
        2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
        L-Phenylglycil人胎盤羊膜細胞*培養(yǎng)基乙酸乙酯 AR,99%

        DL-Phenylglycil人胎盤滋養(yǎng)層細胞*培養(yǎng)基乙酸乙酯  for HPLC, >99.0%(GC)

        L-Proline人胎盤絨毛膜細胞*培養(yǎng)基甲溶液 AR,含10-15% 甲穩(wěn)定劑

        D-Proline人平滑肌細胞*培養(yǎng)基甲 Standard for GC,>99.9%

        DL-Proline人成纖維細胞*培養(yǎng)基甲 AR,99.5%

        BOC-L-Proline人卵巢上皮細胞*培養(yǎng)基甲 CP,99.5%

        BOC-D-Proline人卵巢成纖維細胞*培養(yǎng)基甲 AR,無級

        L-Hydroxyproline人卵巢微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基甲  for HPLC, ≥99.9%

        L-Threonine人內(nèi)膜上皮細胞*培養(yǎng)基甲 農(nóng)殘級, ≥99.9%

        D-Theronine人頸上皮細胞*培養(yǎng)基甲  ≥99.9%(GC)

        DL-Theronine人支持細胞*培養(yǎng)基甲 ACS

        BOC-L-Threonine人腎小球內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基甲 分析標準品,99.9%

        CBZ-L-Threonine人腎管狀上皮細胞*培養(yǎng)基甲 電子級

        L-Tryptophan人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基甲 ACS 光譜級, ≥99.9%

        D-Trytophan人腎上皮細胞*培養(yǎng)基甲 LC-MS,≥99.9%

        DL-Trytophan人輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基甲   色譜級+, ≥99.9%

        順鉑(標準品)PKA(Protein Kinase A)  蛋白激酶A(多肽)TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑抗體

        酞普蘭PLAU/uPA (Plasmigen activator,urokinase)  尿激酶型纖溶酶原激活因子(多肽)TFF3  三葉肽因子3抗體

        西酞普蘭(標準品)Podoplanin Protein  平足蛋白抗原TFF2  三葉肽因子2抗體

        克拉曲濱,克拉利賓Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor)  “蒙”蛋白又稱“曼”蛋白TFF1/BCEI  癌雌激素誘導(dǎo)蛋白抗體

        克拉霉素Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1)  多囊腎蛋白1抗原TFEB  T淋巴細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體

        克拉霉素(標準品)Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)  多囊腎蛋白2抗體TFE3  轉(zhuǎn)錄因子E3

        克林霉素磷酸酯phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide  磷酸化蛋白激酶B抗原(絲氨酸磷酸化位點:473)TFDP3  轉(zhuǎn)錄因子DP3抗體(肝癌相關(guān)抗原661)

        克林霉素磷酸酯(標準品)RKIP(Raf kinase inhibitor protein)  Raf激酶抑制蛋白抗原TFDP2/DP2  轉(zhuǎn)錄因子E2F二聚體蛋白2抗體

        酸氯倍他索pre-X protein[Hepatitis B virus]N-Terminus  乙肝病毒pre-X蛋白抗原(N端)TFCP2C  轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體

        克羅拉濱/氯法拉濱pre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus]  乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)TFAR19/PDCD5  凋亡相關(guān)蛋白5抗體
        恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT200毫升

        人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:5克

        人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃1克

        人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

        人丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃5克

        人丙二(MDA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1米

        人丙酸激酶(PK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人丙酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500支/包
        檢測步驟:
        一、 試劑的準備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

         

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